آماده‌سازی نیمی از نتیجه است
بیشتر خطاهای کروماتوگرافی مایع از ستون یا دستگاه نیست؛ از نمونه کدر، غلیظ یا ناسازگار با فاز متحرک است. آماده سازی نمونه HPLC اگر درست انجام شود، عمر ستون را چند برابر و پیک‌ها را تکرارپذیر می‌کند.
اصول پایه جداسازی را اگر تازه‌کار هستید در راهنمای اصول HPLC مرور کنید. این راهنما بر اساس تجربه تیم دستوا با نمونههای واقعی نوشته شده و روی آماده‌سازی تمرکز دارد.
مراحل پایه پیش از تزریق
این چهار مرحله را به همین ترتیب انجام دهید:
- همگن‌سازی کامل نمونه؛ آسیاب برای جامدها و هم‌زدن کافی برای مایعات
- استخراج آنالیت با حلال سازگار با ستون و فاز متحرک
- سانتریفیوژ برای ته‌نشست ذرات معلق و باقی‌مانده بافت
- فیلتراسیون نهایی با فیلتر سرنگی پیش از ریختن در ویال
انتخاب فیلتر و اندازه منفذ
فیلتراسیون نمونه ارزان‌ترین بیمه ستون است. انتخاب غشا به حلال نمونه بستگی دارد:
اندازه منفذ هم مهم است: برای ستونهای معمولی با ذرات ۳ تا ۵ µm فیلتر ۰٫۴۵ µm کافی است؛ برای ستونهای زیر ۲ µm و نمونههای حساس از فیلتر ۰٫۲۲ µm استفاده کنید.
| غشا | کاربرد رایج | نکته |
|---|---|---|
| PTFE | حلال‌های آلی و نمونههای چرب | برای محلول‌های آبی خالص مناسب نیست |
| نایلون | نمونههای آبی و مخلوط‌های ملایم | انتخاب عمومی برای بیشتر نمونه‌ها |
| PVDF | نمونههای پروتئینی و آبی | جذب پروتئین پایین |
رقیقسازی هوشمندانه
نمونه‌ای که با حلال قویتر از فاز متحرک رقیق شود، پیک پهن یا دوشاخه می‌دهد. تا جایی که انحلالپذیری اجازه می‌دهد، نمونه را با فاز متحرک یا حلالی ضعیفتر از آن رقیق کنید.
غلظت آنالیت را در محدوده خطی روش نگه دارید؛ نمونه بیش از حد غلیظ ستون را آلوده می‌کند و پاسخ دتکتور را از خطی بودن خارج می‌کند. اگر بین HPLC و LC-MS مردد هستید، مقایسه HPLC و LC-MS را ببینید.
اشتباه‌های رایج
این اشتباه‌ها بیشتر از هر چیز دیگری نتیجه را خراب می‌کنند:
- تزریق نمونه کدر یا دارای ذرات معلق بدون فیلتراسیون
- غشایی که حلال نمونه آن را حل می‌کند و خودش آلودگی می‌سازد
- رقیقسازی با حلال بسیار قویتر از فاز متحرک
- پر کردن بیش از حد ویال یا باقی ماندن حباب در مسیر نمونه
- فراموش‌کردن نمونه شاهد و استاندارد در هر بچ اجرا
سفارش این خدمت از دستوا
اگر نمونه شما محدود است یا روش به بهینه‌سازی نیاز دارد، دستوا به‌عنوان ارائه‌دهنده خدمات آزمایشگاهی در تهران، آماده‌سازی و آنالیز را یک‌جا انجام می‌دهد. فهرست آزمون‌های کروماتوگرافی را در کاتالوگ آزمون‌ها ببینید و پیش از ارسال نمونه با کارشناس هماهنگ کنید: درخواست پیش‌فاکتور.