فلوسایتومتری چگونه کار میکند؟
فلوسایتومتری سلولها را یکی‌یکی از جلوی پرتو لیزر عبور میدهد و پراکندگی نور و فلورسانس هر سلول را ثبت میکند. فوکوس هیدرودینامیک سلولها را ردیف میکند تا هر سلول جداگانه بررسی شود و داده بهصورت آمار تکسلولی جمع شود، نه میانگین یک لوله.
هر رویداد ثبت‌شده شامل پراکندگی و شدت فلورسانس است؛ با گیت‌گذاری روی نمودار نقطه‌ای، زیرجمعیت‌های سلولی از هم تفکیک می‌شوند.
پارامترهای اندازه‌گیری
چهار پارامتر پایه در هر رویداد ثبت میشود؛ شناخت آن‌ها پیش‌شرط گیت‌گذاری درست است:
| پارامتر | چه چیزی را نشان میدهد | کاربرد متعارف |
|---|---|---|
| FSC (پراکندگی رو به جلو) | اندازه تقریبی سلول | تفکیک جمعیت‌ها بر اساس اندازه |
| SSC (پراکندگی جانبی) | پیچیدگی و گرانولاریته | جداسازی لنفوسیت، مونوسیت و گرانولوسیت |
| فلورسانس | شدت مارکر متصل به آنتی‌بادی | سنجش بیان مارکرهای سطحی و درون‌سلولی |
| رنگ حیات/مرگ | وضعیت زنده‌مانی | حذف سلول‌های مرده از آنالیز |
آماده‌سازی نمونه
کیفیت داده از لحظه آماده‌سازی نمونه تعیین میشود:
- سلولها را به سوسپانسیون تکسلولی برسانید و از صافی ۴۰ یا ۷۰ میکرونی عبور دهید تا نازل مسدود نشود.
- گیرنده‌های Fc را مسدود کنید تا اتصال غیراختصاصی آنتی‌بادی کم شود.
- برای مارکرهای درون‌سلولی، مراحل فیکس و پرمیابیلیزاسیون را مطابق پروتکل کیت انجام دهید.
- کنترل‌های ایزوتایپ و FMO را کنار نمونه‌ها بگذارید؛ مرز مثبت و منفی را همین کنترل‌ها تعیین می‌کنند.
آنالیز و جداسازی سلولی
آنالیز سلولی رایج شامل سنجش چرخه سلولی با رنگ DNA، بررسی آپوپتوز با انکسین V و شمارش زنده‌مانی است. در سورتینگ سلولی، جمعیت مشخص‌شده بهصورت فیزیکی در لوله جدا جمعآوری میشود و می‌توان آن را دوباره کشت داد.
کاربردها و محدودیت‌ها
فلوسایتومتری در زیست فناوری و پژوهش سلولی برای فنوتایپینگ سلول‌های ایمنی، سنجش بیان مارکر و جداسازی جمعیت‌های نادر به کار می‌رود. مزیت آن سرعت بالا و داده تکسلولی است؛ محدودیت، نیاز به سوسپانسیون تکسلولی و حساسیت نتایج به تنظیم جبران فلورسانس است.
اطلاعات مکانی بافت در این روش از دست می‌رود؛ برای سنجش مکمل زنده‌مانی می‌توانید آزمون MTT را کنار آن قرار دهید.
سفارش آزمون فلوسایتومتری از دستوا
زیست‌فناوری دستوا در مجموعه خدمات آزمایشگاهی خود، فلوسایتومتری را برای پروژه‌های پژوهشی با گزارش نمودارهای نقطه‌ای و هیستوگرام ارائه میدهد. جزئیات پنل‌های قابل اجرا در کاتالوگ آزمون‌ها آمده است.
برای طراحی پنل مارکرها و دریافت پیش‌فاکتور، فرم درخواست پیش‌فاکتور را تکمیل کنید یا از صفحه خدمات با کارشناس دستوا هماهنگ شوید.